247月

12bet(Fluorescence in situ hybridization,FISH)(图) – 实验方法

试验规律

12bet(Fluorescence in situ hybridization FISH是一种新切开的分子细胞遗传论技术,是20世纪80年头后期在原非常敏捷原位杂交技术的按照开展起来的一种非敏捷原位杂交技术。眼前,该技术已被范围广泛的应用于牲口A的探索。、染色体微细结构变动剖析、病毒感染剖析、胎前检查、提取岩芯遗传论和染色体组退化在诸多包围。。鱼的基本规律是运用已知标志的单链核素。,按照碱基求余规律,匹偶中未知单链核素的异性兼备,可杂交双链核素的产生。因DNA分子沿着染色体用法说明序列。,相应地,声响可以直地与染色体杂交以确定方向一般的。。与习俗敏捷标志原位杂交比力,12bet具有快速地、检测暗号专心、具有高特征和多个的上色的私生子,相应地,它在分子细胞遗传论中受到了范围广泛的的关怀。。

在杂交中运用的声响大致上可分为三个CA。:1)染色体特征反复序列声响,诸如,希腊字母的第每一字母卫星、卫星III级探测,杂交动物的目的常常大于1MB。,不含到处序列,近的目的,穿插暗号专心,倾向检测;2)柜台尽量的染色体或染色体的区域特征声响,它由染色体或染色体上的极不同卵的的核糖酸结合。,可以从机器人到BACT达到目标染色体特征大汁赢得。;3)特确定方向置发现者,由每一或多个机器人序列结合的。
直地和二手的标志的办法可用于标志声响。。二手的标志是使用维生素标志DNA声响。,杂交后,用荧光素抗维生素釉桨或STRE检测莲藕。,同时,还可运用亲和素-维生素-荧光素使严重。,缩小荧光暗号,可以检测到500 bp的分段。。直地标志是荧光素与声响核的直地河道兼备,荧光素核苷酸三磷酸与声响兼备。直地标志法检测简略,但鉴于缺少暗号缩小,相应地,易感知不如二手的标志法好。。

试验器具和推论的

相干receiver 收音机的预备

1)20×SSC: NaCl,枸橼酸钠,加水至1000千分之一升(pH至10mol/L NaOH)。

2)去水合氢甲酰胺(DF):在10mL甲酰胺中参加10g混合床水合氢交换树脂。。电磁学搅拌30min,滤纸滤芯。

3)70%甲酰胺/ 2×SSC的主体分:35mL甲酰胺,5mL 20×SSC,10mL水。

4)50%甲酰胺/ 2×SSC的主体分:100mL甲酰胺,20mL 20×SSC,80mL水。

5)50%葡多醣刻薄话酯(DS)的主体分:65℃水浴闻到,4oC或-20oC禁猎。

6)私生子:8 L主体分25% DS,20 L 20×SSC混合。(或40 L主体分50% DS),20µL 20×SSC,40 L DDH2O混合)取是你这么说的嘛!结交50 L,混合5升DF。终极浓度为主体分10% DS。,2×SSC,主体分50%。

7)PI/反没落receiver 收音机

PI原液:先用双水使具一定形式receiver 收音机,浓度为100 g/ml。,取出1ML,双蒸水39千分之一升,终极浓度为g/ml。。抗使出血原液:用PBS缓冲溶解制剂溶解,浓度为10mg/ml,旧的NaHCO3的回响pH值为。采用不只是receiver 收音机1ML,参加9ML丙三醇,混匀。

PI/antifade溶解:PI和抗使出血原始结交按主体比1完整混合。,20oc节省附属物。

8)DAPI/抗没落receiver 收音机:去水合氢水制剂1mL/mg DAPI贮液,按主体比1:300,将防使出血溶解潮解到任务流泪中。

9)闭液Ⅰ:主体分5%BSA 3mL,20×SSC 1mL,ddH2O 1mL,吐温20~5 L混合。

10)封气体II:主体分5% BSA 3mL,20×SSC 1mL,山羊浆液250 L,ddH2O 750µL,吐温20~5 L混合。

11)荧光检测试剂片潮解剂:主体分5% BSA 1ML,20×SSC 1mL,ddH2O 3mL,吐温20~5 L混合。

12)洗提液:100mL 20×SSC,加水至500千分之一升,加Tween20 500µL。

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注